Elucidation of the Role of GFAT1 in the Growth of Pancreatic Ductal Carcinoma and Development of Novel GFAT1 Inhibitors

摘要

  先前文獻提及六胺生物合成途徑（hexosamine biosynthetic pathway）限速酶 GFAT1 之RNA表現量與胰腺癌之進程有正相關性，但其對於胰腺癌發展的重要性仍不清楚，除此之外目前專一性高的 GFAT1 抑制劑仍有待發展。本研究藉由免疫組織化學染色分析來驗證 GFAT1 蛋白質表現量在胰腺癌中大量表達。並利用慢病毒表達 GFAT1 shRNA 降低其表現量，和軟瓊脂膠生長分析（soft agar colony formation test）和動物試驗來確認 GFAT1 蛋白質表現量會影響胰腺癌細胞的生長。進一步，我們參考之前的文獻將 His-Tag 藉由 PCR 接於 GFAT1 序列之 Gly299 與 Asp300 間，並置於 pcDNA3.1 質體上，藉由 Expi293F 細胞株協助生產蛋白，並透過蛋白質純化步驟得到純度和活性較高之人類 GFAT1 蛋白，發展以冷光素酶檢測法（Luciferase assay）為基礎的高速篩選方法，以尋找專一且有效的 GFAT1 抑制劑用於胰腺癌治療。